1.項(xiàng)目背景    

摘自《人偏肺病毒感染診療方案（2023年版）》    

人偏肺病毒感染是人體感染人偏肺病毒（humanmetapneumovirus，hMPV）后引起的一種急性呼吸道傳染病，全年散發(fā)，多發(fā)生于冬末及春初。hMPV感染大多表現(xiàn)為輕度自限性疾病，部分患者因出現(xiàn)毛細(xì)支氣管炎、肺炎、慢性阻塞性肺疾病（COPD）急性加重和支氣管哮喘急性發(fā)作等并發(fā)癥需要住院治療，免疫功能低下者可進(jìn)展為重癥肺炎，出現(xiàn)急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）或多器官功能不全等，甚至導(dǎo)致死亡。

1.1 病原學(xué)    

hMPV屬于肺炎病毒科，偏肺病毒屬，為有包膜的單股負(fù)鏈RNA病毒，平均直徑大約200nm。hMPV包括A和B兩個(gè)基因型，可分為A1、A2、B1、B2四個(gè)亞型，這些亞型常常同時(shí)流行，各亞型病毒傳播力和致病性未見明顯差別。

hMPV對(duì)熱敏感，60℃ 30分鐘可滅活；對(duì)乙醚、氯仿等有機(jī)溶劑敏感；1%次氯酸鈉等含氯消毒劑、5%福爾馬林、2%戊二醛、1%碘伏等常用消毒劑可滅活病毒；對(duì)0.1%脫氧膽酸鈉、十二烷基硫酸鈉（SDS）和曲拉通X-100（TritonX-100）等去污劑敏感。

1.2 臨床表現(xiàn)    

潛伏期3-9天，多為3-6天。

多表現(xiàn)為上呼吸道感染癥狀，如發(fā)熱、咳嗽、鼻塞、流涕、聲音嘶啞等，約1周左右癥狀逐漸緩解。病情嚴(yán)重者可出現(xiàn)毛細(xì)支氣管炎、重癥肺炎和ARDS，COPD患者感染后病情可加重，支氣管哮喘患者可誘發(fā)急性發(fā)作。嚴(yán)重下呼吸道感染多見于幼兒、老年人等人群。肺移植、造血干細(xì)胞移植等免疫功能低下人群感染后癥狀更重，病死率也相對(duì)較高。

1.3 實(shí)驗(yàn)室及影像學(xué)檢查    

a.病毒核酸檢測(cè)：采集呼吸道標(biāo)本（鼻咽拭子、咽拭子、痰液、支氣管肺泡灌洗液等）采用熒光定量PCR、病毒基因測(cè)序等方法檢測(cè)hMPV核酸。核酸檢測(cè)的敏感性和特異性高。

b.病毒抗原檢測(cè)：酶免疫法、膠體金法和免疫熒光法等方法檢測(cè)呼吸道標(biāo)本中hMPV抗原，但病毒抗原檢測(cè)陰性不能除外診斷。

c.病毒培養(yǎng)分離：從呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)分離hMPV。

d.血清學(xué)檢測(cè)：檢測(cè)血清中特異性IgM抗體和IgG抗體，IgM抗體檢測(cè)敏感性和特異性較低。

2.測(cè)試方案及性能表現(xiàn)    

針對(duì)人偏肺病毒（hMPV）抗原的檢測(cè)，西寶生物推出2種單克隆抗體和1種抗原，適合膠體金免疫層析、彩色乳膠免疫層析及熒光免疫層析平臺(tái)。具體性能如下。

（以下評(píng)估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗(yàn)證，建議客戶根據(jù)自身工藝進(jìn)行抗體交叉配對(duì)驗(yàn)證）。    

2.1 膠體金免疫層析平臺(tái)    

2.1.1 抗體配對(duì)組合1：人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號(hào)：FKY0936D）標(biāo)記膠體金+人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號(hào)：FKY0936C）劃膜；    

2.1.2 人偏肺病毒（HMPV）M抗原（貨號(hào)：EDD0812A）用合適的稀釋液按照理論濃度依次稀釋到50ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL、0.1ng/mL、0.05ng/mL。

2.1.3 反應(yīng)模式：80uL樣品直接上樣，反應(yīng)時(shí)間15min-20min；

2.1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在膠體金免疫層析平臺(tái)，采用此抗體配對(duì)組合1測(cè)試HMPV M抗原稀釋梯度均顯色，靈敏度可達(dá)0.05ng/mL。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明此抗體配對(duì)在膠體金層析平臺(tái)測(cè)試性能良好。

膠體金層析平臺(tái)測(cè)試抗原梯度示意圖

2.1.5 特異性：分別測(cè)試濃度為10ug/mL的腺病毒抗原、合胞病毒抗原、2019-nCOV-SRFc3cho抗原、2019-nCOV-SRHcho抗原，結(jié)果均為陰性，表明特異性良好。

膠體金層析平臺(tái)測(cè)試特異性示意圖

2.2 彩色乳膠免疫層析平臺(tái)    

2.2.1 抗體配對(duì)組合2：人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號(hào)：FKY0936D）標(biāo)記彩色乳膠+人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號(hào)：FKY0936C）劃膜；

2.2.2 人偏肺病毒（HMPV）M抗原（貨號(hào)：EDD0812A）用合適的稀釋液按照理論濃度依次稀釋到50ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL、0.1ng/mL、0.05ng/mL、0.02ng/mL、0.01ng/mL、0.005ng/mL。

2.2.3 反應(yīng)模式：80uL樣品直接上樣，反應(yīng)時(shí)間15min-20min；

2.2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在彩色乳膠免疫層析平臺(tái)，采用此抗體配對(duì)組合2測(cè)試HMPV M抗原稀釋梯度均顯色，靈敏度可達(dá)0.01ng/mL。表明此抗體配對(duì)在彩色乳膠免疫層析平臺(tái)測(cè)試性能良好。

彩色乳膠層析平臺(tái)測(cè)試抗原示意圖

2.2.5 特異性：分別測(cè)試濃度為10ug/mL的腺病毒抗原、合胞病毒抗原、2019-nCOV-SRFc3cho抗原、2019-nCOV-SRHcho抗原，結(jié)果均為陰性，表明特異性良好。

彩色乳膠層析平臺(tái)測(cè)試特異性示意圖

2.3 熒光免疫層析平臺(tái)    

2.3.1抗體配對(duì)組合3：人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號(hào)：FKY0936D）標(biāo)記熒光微球+人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號(hào)：FKY0936C）劃膜；

2.3.2 人偏肺病毒（HMPV）M抗原（貨號(hào)：EDD0812A）用合適的稀釋液按照理論濃度依次稀釋到50ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL、0.1ng/mL、0.05ng/mL、0.01ng/mL。

2.3.3 反應(yīng)模式：80uL樣品直接上樣，反應(yīng)時(shí)間15min-20min；

2.3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在熒光免疫層析平臺(tái)，采用此抗體配對(duì)組合3測(cè)試HMPV M抗原稀釋梯度靈敏度可達(dá)0.01ng/mL（如表實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)所示）。表明此抗體配對(duì)在熒光免疫層析平臺(tái)測(cè)試性能良好。此外，測(cè)試濃度為10ug/mL的腺病毒抗原、合胞病毒抗原、2019-nCOV-SRFc3cho抗原、2019-nCOV-SRHcho抗原，結(jié)果均為陰性，表明特異性良好。

表1  hMPV抗體配對(duì)組合測(cè)試數(shù)據(jù)

測(cè)試使用熒光儀器:和邁FIC-S100。    

3.產(chǎn)品信息